在保存和處理分選后的細(xì)胞時(shí),要始終注意無菌操作,避免細(xì)胞污染,同時(shí)根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)需求和細(xì)胞特性選擇合適的方法。
細(xì)胞分裂素的主要作用是促進(jìn)細(xì)胞分裂。細(xì)胞分裂素不僅能促進(jìn)細(xì)胞分裂,也可以使細(xì)胞體積擴(kuò)大。但和生長素不同的是,細(xì)胞分裂素是通過細(xì)胞橫向擴(kuò)大增粗,而不是促進(jìn)細(xì)胞縱向伸長來增大細(xì)胞體積的,它對細(xì)胞的伸長有一定的抑制效應(yīng)。
胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中最常用的血清類型之一。它來源于胎牛,富含多種營養(yǎng)成分和生長因子,能夠?yàn)榧?xì)胞提供全面的生長支持。胎牛血清由于未接觸外界環(huán)境,抗體和補(bǔ)體含量低,對細(xì)胞的潛在毒性小,因此廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞培養(yǎng),尤其是對培養(yǎng)環(huán)境要求較高的細(xì)胞類型,如干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞等。
滅菌的徹底性是培養(yǎng)基滅菌工程的首要要求。必須確保培養(yǎng)基中的細(xì)菌、病毒、真菌等微生物被完全殺滅,以避免微生物對實(shí)驗(yàn)或生產(chǎn)造成污染。為實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo),需要嚴(yán)格控制滅菌過程中的溫度、壓力和時(shí)間等參數(shù),確保滅菌效果達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。
反轉(zhuǎn)錄酶主要用于體外cDNA的合成。目前最常用的反轉(zhuǎn)錄酶(reverse transcriptase)有SuperscriptII、M-MLV和AMV等。它們具有依賴于RNA或DNA的DNA聚合酶活性和RNaseH酶活性,可以以RNA分子為模板,合成出一條DNA鏈。形成的DNA是與RNA模板互補(bǔ)的,因而反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA分子稱之為cDNA。
在選擇試劑瓶時(shí),需要綜合考慮試劑的性質(zhì)、純度要求、狀態(tài)、保存期限以及安全性等因素,以確保試劑的質(zhì)量和使用安全。
藥物的分離純化是從合成或天然來源中獲得的藥物混合物中,將目標(biāo)化合物純化為高純度的過程。這是藥物研發(fā)和制造過程中非常重要的步驟,因?yàn)楦呒兌鹊乃幬锎_保了其安全性和有效性。
Western Blot顯色的方法主要有以下幾種: i. 放射自顯影 ii. 底物化學(xué)發(fā)光ECL iii. 底物熒光ECF iv. 底物DAB呈色 現(xiàn)常用的有底物化學(xué)發(fā)光ECL和底物DAB呈色,體同水平和實(shí)驗(yàn)條件的是用第一種方法,目前發(fā)表文章通常是用底物化學(xué)發(fā)光ECL。只要買現(xiàn)成的試劑盒就行,操作也比較簡單,原理如下(二抗用HRP標(biāo)記):反應(yīng)底物為過氧化物+魯米諾,如遇到HRP,即發(fā)光,可使膠片曝光,就可洗出條帶。