細菌的芽胞具有厚而致密的壁,透性低,不易著色,若用一般染色法只能使菌體著色而芽胞不著色(芽孢呈無色透明狀)。芽孢染色法就是根據(jù)芽孢既難以染色而一旦染上色后又難以脫色這一特點而設(shè)計的。所有的芽孢染色法都基于同一個原則:除了用著色力強的染料外,還需要加熱,以促進芽孢著色。當染芽孢時,菌體也會著色,然后水洗,芽孢染上的顏色難以滲出,而菌體會脫色。然后用對比度強的染料對菌體復(fù)染,使菌體和芽孢呈現(xiàn)出不同的顏色,因而能更明顯地襯托出芽孢,便于觀察。
牛血清白蛋白是血液中的主要成分(38g/100ml),分子量68kD,等電點4.8,含氮量16%,含糖量0.08%,僅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白由581個氨基酸殘基組成,其中35個半胱氨酸組成17個二硫鍵,在肽鏈的第34位有一自由巰基。白蛋白可與多種陽離子、陰離子和其他小分子物質(zhì)結(jié)合。牛血清蛋白溶液可以作為測量蛋白質(zhì)含量的標準曲線用。
注意觀察液滴落點周圍溶液顏色變化。開始時應(yīng)邊搖邊滴,滴定速度可稍快(每秒3~4滴為宜),但是不要形成水流。接近終點時應(yīng)改為加一滴,搖幾下,最后,毎加半滴,即搖動錐形瓶,直至溶液出現(xiàn)明顯的顏色變化,準確到達終點為止。
自然界中,質(zhì)粒是在營養(yǎng)充足時出現(xiàn)的,它在結(jié)構(gòu)、大小、復(fù)制方式,每個細菌的拷貝數(shù),在不同的細菌體內(nèi)的繁殖力不同,在菌種之間的轉(zhuǎn)移力等方面都會變化,可能最重要的是質(zhì)粒所攜帶的特征的改變。大多數(shù)原核生物的質(zhì)粒是雙鏈環(huán)狀的DNA分子;但是無論是在革蘭氏陽性還是陰性菌體內(nèi)都可以發(fā)現(xiàn)線狀質(zhì)粒。質(zhì)粒大小變化很大,可從幾個到數(shù)百個kb。
由于貼壁細胞貼壁生長,接觸抑制,長滿一瓶后貼壁較緊,不易取出。這時必須用胰蛋白酶或者膠原蛋白酶處理,使其分散開后取出,然后在放入新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
當細胞所處溫度低于0°C時,細胞脫水,細胞中可溶性物質(zhì)濃度升高,并在細胞內(nèi)形成冰晶,冰晶的大小對細胞的影響是不同的,大冰晶容易造成細胞膜、細胞器的損傷和破裂,故造成復(fù)蘇出來的細胞存活率、狀態(tài)等與凍存前的狀態(tài)相差甚遠。因此,我們在凍存細胞的時候會采取兩個措施,一加入低溫保護劑,二,慢凍細胞。
目前多數(shù)實驗室培養(yǎng)基滅菌后會放置水浴或者烘箱中,需使用的時候拿出來直接倒板。但培養(yǎng)基靜置時間不宜過長,靜置時間一般不超過4小時。靜置時間過長,培養(yǎng)基中瓊脂可能會少量凝固,形成類似絮狀析出。
免疫熒光(Immunofluorescence,IF)原理免疫熒光技術(shù)是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù)。它是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光基團,再用這種熒光抗體(或抗原)作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原(或抗體)。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細胞或組織,從而確定抗原或抗體的性質(zhì)和定位,以及利用定量技術(shù)(比如流式細胞儀)測定含量。
細胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個細胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞,這是克隆技術(shù)必不可少的環(huán)節(jié),而且細胞培養(yǎng)本身就是細胞的克隆。